蛋白质挖掘机或者其产生的蛋白质生物化学 Bashny.Net

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35张照片+字母

我们大家都去上学，而且，除其他事项外，对生物和化学课本。他们中有些人可能曾经读过。有时候，我们听到的消息，英国科学家已经取得的又一突破，有时甚至shlopotat诺贝尔奖为他的发现。有人可能会想象，一个聪明的头发花白的男子戴眼镜，谁终其一生都花了很多心思，是个天才，有一天它明白的想法。好吧，我会告诉你的话，在现实中，所有这些发现很少是一个人。通常有实验室的负责人（后来给他在诺贝尔 并运行一组科学家，研究生，本科生和学生容易的情况下，很难想象居然是多少工作投入的生物学和化学。研究生一行教科书试图数十组合，找出到底是怎么进行怎样的反应或工艺的发明的方法，如何更好，更精确的测量结果。一个实验可以持续数小时至数年（根据拍摄对象研究）。在书中一行有时花了好几年的人劳动。

所以，我是研究生，一个生物化学家，我29岁，我喜欢它，当他们打电话给我露。我住的科学家，实验者的生活，对我这样的生活是非常喜欢的一些书的幻想生活的魔术师。全日（周末常常），我们正坐在自己的塔魔法等级10实验室这个原因，在世界各地的许多城市都开展了城市，不碍眼，以普通公民，显然的。我甚至在德国的官方地址是“某某一条街，塔排名第四。”目前，我正在法国斯特拉斯堡。我们与各种仪器，其目的以任何方式不能被他们的外表猜测，读奇怪的信件，超出凡人的力量，致力于为有学习了很多年，了解他们一些地狱。[下一页]

我想说明一个正常的工作日通常的研究生（星期四11年7月21日 - 虽然平日，周末，有什么区别...），并告知详细的描述了，为什么我们的工作，因为我喜欢它。因为我很有趣的阅读什么人在做其他工作，我以为有人可能有兴趣了解生物化学。此外，忽然有些怀疑者的学生看到这个帖子，并决定是否送他到他的脚在研究生院（这个东西很业余）。我也真的好奇，如果我能解释的门外汉都在生物化学中使用的最基本的方法。因此，空腹很多管子，奇怪的设备，器具，罐，毛细血管。而大量的解释和技术细节。



我是属于大部分人类，它的猫头鹰。这些年来他的生活花费在学校，大学，工作，主人从来不强迫我习惯醒来，早上用一场酣畅淋漓的和快速开发剧烈活动。在一般出于某种原因，科学家们COS非常多，他们肯定很快发明了科学证据证明你是个夜猫子或早起，因为你的新陈代谢的特殊性。在一般情况下，指的是这方面的证据，我平静地唤醒了三个闹钟（8:15，8点45至9:00），触发报警不生物学。 9点五十 - 生物学我在9点40分置的地方。 10分钟后prodiraniya的眼睛，我还是辗转反侧躺在床上痛苦和zyryu窗口。窗外，如果你运气好，云层给



最后，我还是爬起来，因为瞬移，科学家们还没有发明。由于这样的事实，我真的很喜欢睡觉，我已经开发了进化的习惯很快在早上组装。我赶紧洗，穿好衣服，抢袋（在所有的一切去整整10分钟）不吃早餐，“工作，工作，他最喜欢的工作！”。运行工作，10分钟的步行，太。赢得了广大NIICHAVO看到在草丛中。



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您好，职场！



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站起来，我站起来，而是因为我的心还在早晨，我在自动驾驶功能。有必要喝咖啡（我却几乎没有影响），吃甜的东西，然后松手。吃，喝在实验室里，当然是不可能的，并且可以在专门指定的区域



咖啡之后，我还是有点自尊的互联网，我的头清理了，我曲臂丁腈手套和枝条发育粗糙的活动。我们的工作，当然，所有的戴手套，首先，不要让你手中的一切不应该，其次，不要把在超洁净设计一些泥土。



艺术家的作品，用刷子，一个钢琴家弹钢琴，在这里整整一天我也挥舞着吸管。这样的移液器获得少量的液体 - 任何低于1毫升高达1微升。一微升 - 它是这样一个malyuyuyuyuyuyusenkaya滴。相比较而言，如果滴落所有已知的玻璃吸管，例如，眼药水 - 以这样一种降约为200微升。吸液管有一个可拆卸的一次性吸头，您可以在照片上每一个新入职的清洁液尖看。



而关于它是什么，我们今天要做的，现在几句话。对于这个故事，我选择了最典型的一天。世界上大多数研究生的生化学家正在从事一个比较单调的活动，即纯化的蛋白质（=“蛋白质”），并给予他们各种测试。蛋白质 - 是一个巨大的类生物分子的总称。为什么研究生世界各地这么多的蛋白质，你问？在活细胞的蛋白质执行许多最多样化的功能的事实。试想一下，比方说，一个汽车厂。如果整个工厂 - 活细胞，​​几乎一切都在它里面 - 所有机，输送机，工作，和汽车本身 - 这将是蛋白质。科学家们，首先，了解究竟是什么函数执行单元中的某个特定的蛋白质。其次，与已知的功能蛋白质，可作为进一步研究的工具。如果我们要使用任何蛋白质，那么我们在哪里得到的呢？当然，在活细胞！因为它是在这个工厂生产他们大量！要做到这一点，最常用的细菌细胞，因为它们很容易且廉价地维持和增长很快。现代基因工程的方法让你的细胞程序，使其产生更多的蛋白质需要我们。然后我们就会让他离开那里和清洁。我们将在实验中使用。

细菌细胞生长在一个液体营养培养基。例如，这里在这种烧瓶（烧瓶5升的液体在其中1L）位于一个房间里的温度保持37℃（或在烤箱培养箱）。将烧瓶安装在一个特殊的平台，其中连续旋转和搅动的内容，其中所述培养基富含氧气，并从该细菌生长最好。照片来自“昨天”，但随后冷静地看到那里的细菌生活在实验室。过夜我们已经发展细菌到所需阶段，然后沉淀的细菌细胞从液体（粘在离心机和离心在6000rpm，细菌细胞 - “重”，因此，在陶器通过离心力的底部解决），从陶器的底部掏他们抹刀并立即冷冻在液氮（-196温度℃）。即时冻结是非常重要的细胞，它们的内容还没有开始从这种厚颜无耻的治疗崩溃（如我们记住，我们要提取的细胞生物反应器，我们已经建立了宝贵的蛋白质）。



所以，11:08小时，我跑在冷冻样品的前夕冷冻手套。在-80℃下储存在冰箱中冷冻细胞和其他有价值的样本我打开冰箱的第一件事情出了它带来下来的厚厚的蒸汽。



很快，以免冻结你的手指的手套，争夺我煮晚上细胞。它们被包裹在金属箔和我暗恋他们像一块巧克力，对较小的部分，直到融化。当他们解冻，细胞的球会类似于一块棕灰色粘土具有非常独特的气味。的细菌，它是用于在实验室工作的标准，称为大肠杆菌（大肠杆菌，或者，以缩略形式，大肠杆菌）。这是相同的大肠杆菌，其中有几个killogrammov住在我们每个人的肠子。作为体外，这就是，虽然它有一个非常独特的气味，但气味还是不浪费生命。不过，我怕人家不习惯，鉴赏家嗅觉的精品意识，我们不会把这种愉快的气味。



的道路上的冰柜在一个naberёm冰盒 - 将保持样品在冰上，因为在低温条件下，所有的化合物更稳定。



熔化细菌细胞我们把在试管中，并填充所述特殊盐溶液。需要的溶液，以确保蛋白质，我们正在试图提取从细胞仍然在所有清洗程序不变。在照片中的另一吸更多的流量达30毫升。



因此，我们有细胞漂浮在溶液中。里面的细胞已经觊觎我们的成分（蛋白质）。为了得到它，你需要开始破坏细胞膜，内容洒出。有不同的方法来破坏细胞，留下完整的内容。今天，我们将为此目的而使用超声波。这就是如何设备寻找细胞的破坏 - 事实上，它是一个金属销，这是我们戳权在试管。销振荡出非常高的频率，产生的超声波在介质中 - 被破坏的细胞。该设备因此非常讨厌vereschit和研磨，所以它锁在一个安全的隔音效果。细胞的管必须保持在冰中，由于超声波具有高能量，并将样品加热非常多。



销毁过程大约需要20分钟。在这张照片中，你可以看到，通过细胞样品的破坏较轻，对黑暗的破坏后，变得更加粘稠（粘度当然是不可见的，但我要告诉你）。粘度获取由于这样的事实，所有的生物聚合物（非常长的分子，如DNA和蛋白质），其分别为在细胞内现在流出。



现在，我们已经在体外形成了一种“汤”中，什么都可以游泳！全部原来在细胞中的成分，和它们的数千流动向外并混合。试想一下，你有一个很好的滋补汤，你奇迹般地必须从只小片香菜提取物，并且没有在任何情况下不跌！怎么样？好吧，我不知道汤，如何提取所需的分子，生物化学家早就被发明。我们花了几个纯化步骤。首先，我们戳我们的“汤”的离心机，并悠闲地相对低速（10000转/分）。在此速度，将沉淀到大颗粒的底如细菌细胞壁片段，以及所有的更小的颗粒，包括我们的蛋白质保持漂浮在溶液中。它看起来像一个试管沉积物 - 他把我们，但我们会采取液体进一步纯化。请注意，它是什么，黑暗的。第一阶段花了15分钟。



在接下来的步骤中，我们摆脱核酸（著名的DNA和RNA），它也游于大批量的样本。我们将添加一个特殊试剂zastvlyaet它们放入沉淀物。在照片 - 样前（左）和后（右）加入试剂。



这种情况下，我们也推到一个离心机，也扭曲了10000转/分，和所有的存款消失，再次抛出又一次zaberёm液体本身。注意她是怎么亮。花了约20分钟。



现在，另一个类似的阶段清洗 - 单调但很有效。最后枯燥一步乐趣土堆我们严格一定量的白色粉末（硫酸铵盐）的解决方案。一个小技巧 - 因此沉淀了很多不同的蛋白质，我们并不需要，和我们的宝贵会在溶液中游泳！其他一些研究生在很多年前他折磨，拿起白色粉末，这是必要的它拿，因为我现在用几代人的经验的确切数额，可以这么说。但是，这只是意味着我遭受了别的东西。



下一步做什么用的样品 - 我们已经知道，在建立扭转它在离心机的计划，zaberёm液，快速向前净和杯子，静置在冰箱，因为我们有一个午休！因此，时钟已经13:00。

就餐前蹬分钟5.法国餐厅值得一首抒情题外话！这是我见过的最好的房间，不过，他们说，是不是最好的斯特拉斯堡。当然，法国的，不傻吃。在什么其他的餐厅，你会发现十几个沙拉独自一人，就更不用说了主菜。客人对我的口味，有美食 - 大虾柚子，洛克福奶酪，芝麻菜，鸡菠萝和饼干和其他任何东西。此外，沙拉不要只翻牌倒在一个脸盆大的板块，因为这样做，例如，在德国，并在每个盘沙拉分解艺术 - 审美最小火腿，将柠檬片放入/蛋/ olivochka中分得一杯羹，甚至酱油，有时浇华丽的会标。而最重要的是，好吃！在一般情况下，沙拉迷住了我，让我吃了大部分，甚至是之前的主要课程没有达到，但在那里，太，所有的艺术和美味。一旦出台了一些煮熟的贝类在一个大壳奶酪酱。在德国，我已经看到了很多不同的餐厅，所有的人都被送入饱腹感，在一些 - 好吃的，但从来没有被纳入食物唯美。午餐时，我们更多的时候有两个欢快的同事走。



然而，13时50分，这是一次又一次的工作。获得一分钟，我们的外套，走到北极几乎在这里这扇门。关于大衣是不是一个笑话 - 我们将继续在该温度保持在任何时候都+ 4°C的工作空间它的冷，该死的。



和后面的门，则门!!!有这样！在门后面是，除其他事项外，这样的单元。



对于设备我招呼大家。



我承认，当我第一次看到这个装置，作为一名学生，我几乎在恐惧中逃跑了。在我看来，要理解是绝对没有什么是不可能的，这相当于在复杂的海底。周围还有一些罐，筒，伸出从单位一堆毛细血管，每一个在其解决方案，并坚持到仪器脱开其他详细信息，其中有存在于各种和多样性。在一般情况下，有腿休息。

事实上，一切都容易得多。该装置被称为色谱仪。它用于当存在的组分neskolkiz的混合物，并且必须彼此以某种方式被分离。色谱仪是不同类型的，它是本 - 液相色谱法。它的一个组成部分是一个泵，可以从A点泵液（也就是我们的样本）到B点一路上，样品将通过一个特殊的“净化车间”，这将使我们摆脱不必要的杂质。分离柱的范围：



因此，在休息前，但我们已经留在了冰箱的晚餐是蛋白质的一半纯化的混合物。但是，如果只留一个！坚持-KA混合物注入色谱仪，看看会发生什么。 Naberёm我们的样品放入注射器并轻轻引入到内室色谱仪。



然后点击旁边的“开始”按钮，我们紧张地抽烟的角落，期待的结果！

如何不同分子彼此分开？有多种方法。每种蛋白是唯一的，具有一定的大小，电荷和表面性能。正是这些性质，将被用于分离混合物。最常用的顺序几个纯化步骤，例如，第一尺寸，然后在电荷。

记得灰姑娘。有一次，她被赋予了不同的袋谷物，并从那里一件事有序离开。如果灰姑娘遇到技术性的头脑，她想出了用于该网格。更妙的是几个筛系列中不同大小的细胞。因此，首先，将有可能只选择最小，如小米，然后更多的东西，如扁豆，然后仍较多，如豌豆，蚕豆。为了分离蛋白质生物化学发明了所谓的“分子筛” - 具有一个非常小的孔的材料。更特技分子筛，它是三维的。中空圆筒填充有微观珠子，珠子和通孔。该系统的工作原理是这样的：大的分子不会在珠孔管闲事这么快就失败下来珠之间，没有持有它们。





















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